GB 5009.17-2014食品中總汞與有機(jī)汞的檢測(cè)方法-北京誠驛恒儀科技有限公司

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GB 5009.17-2014食品中總汞與有機(jī)汞的檢測(cè)方法

發(fā)布日期：2018-07-19 瀏覽次數(shù)：8000

新國標(biāo)GB 5009.17-2014 中規(guī)定了食品中總汞與有機(jī)汞的檢測(cè)方法，包括原子熒光光譜分析法和冷原子吸收光譜法（適用于食品中總汞的測(cè)定）、液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用方法（適用于食品中甲基汞的測(cè)定）。

一、食品中總汞的測(cè)定

1 范圍

適用于各類食品中總汞的測(cè)定。

法原子熒光光譜分析法

2 原理

試樣經(jīng)酸加熱消解后，在酸性介質(zhì)中，試樣中汞被硼氫化鉀(KBH4)或硼氫化鈉(NaBH4)還原成原子態(tài)汞，由載氣(氬氣)帶人原子化器中，在汞空心陰極燈照射下，基態(tài)汞原子被激發(fā)至高能態(tài)，在由高能態(tài)回到基態(tài)時(shí)，發(fā)射出特征波長(zhǎng)的熒光，其熒光強(qiáng)度與汞含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

3 試劑和材料

3.1 試劑

3.1.1 硝酸(HNO3)。

3.1.2 過氧化氫(H2O2 ）。

3.1.3 硫酸(H2SO4)。

3.1.4 氫氧化鉀（KOH）。

3.1.5 硼氫化鉀（KBH4)：分析純。

3.2 試劑配置

3.2.1 硝酸溶液(1+9)：量取50mL硝酸，緩緩倒人450mL水中，混勻。

3.2.2 硝酸溶液(5+95)：量取5mL硝酸，緩緩倒人95mL水中，混勻。

3.2.3 氫氧化鉀溶液(5g／L)：稱取5.0g氫氧化鉀，純水溶解并定容至1 000mL，混勻。

3.2.4 硼氫化鉀溶液(5g／L)：稱取5.0g硼氫化鉀，用5.0 g/L的氫氧化鉀溶液溶解并定容至 1 000 mL，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3.2.5 重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g／L):稱取0.05g重鉻酸鉀溶于100mL硝酸溶液（5+95）中。

3.2.6 硝酸—高氯酸混合溶液（5+1）：量取500mL硝酸，100mL高氯酸，混勻。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)品

（HgCl2）：純度≥99％

3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置：

3.4.1 汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00 mg/mL）：精密稱取0．1354 g經(jīng)干燥過的HgCl2，用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g／L)溶解并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，稀釋至刻度，混勻，此溶液濃度為1.00 mg/mL。于4 ℃冰箱中避光保存，可保存2年。或購買經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)。

3.4.2 汞標(biāo)準(zhǔn)中間液（10μg／mL）：吸取1.00mL汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00 mg/mL）于100mL容量瓶中，用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g／L)稀釋至刻度，混勻，此溶液濃度為10μg／mL。于4 ℃冰箱中避光保存，可保存2年。

3．4.3 汞標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（50ng／mL）：吸取0.50mL的汞標(biāo)準(zhǔn)中間液（10μg／mL）于100mL容量瓶中，用0.5g/L重鉻酸鉀的硝酸溶液稀釋至刻度，混勻，此溶液濃度為50ng／mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4 儀器和設(shè)備

注：玻璃器皿及聚四氟乙烯消解內(nèi)罐均需以硝酸溶液（1+4）浸泡24h，用水反復(fù)沖洗，后用去離子水沖洗干凈。

4.1 原子熒光光譜儀。

4.2 天平：感量為0.1mg和1mg.

4.3 微波消解系統(tǒng)。

4.4 壓力消解器。

4.5 恒溫干燥箱（ 50 ℃~300 ℃）

4.6 控溫電熱板（50 ℃~200 ℃）

4.7 超聲水浴箱。

5 分析步驟

5.1 試樣預(yù)處理

5.1.1 在采樣和制備過程中，應(yīng)注意不是試樣污染。

5.1.2 糧食、豆類等樣品去雜物后粉碎均勻，裝入潔凈聚乙烯瓶中，密封保存?zhèn)溆谩?/span>

5.1.3 蔬菜、水果、魚類、肉類及蛋類等新鮮樣品，洗凈晾干，取可食部分勻漿，裝入潔凈聚乙烯瓶中，密封，于4℃冰箱冷藏備用。

5. 2 試樣消解

5.2.1 壓力罐消解法

稱取固體試樣0.2g～1．00g（到0.001g），新鮮樣品0.5g~2.0g或液體試樣吸取1mL~5mL稱量（到0.001g），置于消解內(nèi)罐中，加入5mL硝酸浸泡過夜。蓋上內(nèi)蓋，旋緊不銹鋼外套，放入恒溫干燥箱，140℃~160℃保持4h~5h，在箱內(nèi)自然冷卻至室溫，然后緩慢旋松不銹鋼外套，將消解內(nèi)罐取出，用少量水沖洗內(nèi)蓋，放在控溫電熱板上或超聲水浴箱中，于80 ℃或超聲脫氣2min~5min趕去棕色氣體。取出消解內(nèi)罐，將消化液轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，用少量水分3次洗滌內(nèi)罐，洗滌液合并于容量瓶中并定容至刻度，混勻備用；同時(shí)做空白試驗(yàn)。

5.2.2 微波消解法

稱取固體試樣0.2g～0.5g（到0.001g）、新鮮樣品0.2g~0.8g或液體試樣1mL~3mL于消解內(nèi)罐中，加入5~8mL硝酸，加蓋放置過夜，旋緊罐蓋，按照微波消解儀的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟進(jìn)行消解。冷卻后取出，緩慢打開罐蓋排氣，用少量水沖洗內(nèi)蓋，將消解罐放在控溫電熱板上或超聲水浴箱中，于80 ℃或超聲脫氣2min~5min趕去棕色氣體。取出消解內(nèi)罐，將消化液轉(zhuǎn)移至25mL塑料容量瓶中，用少量水分3次洗滌內(nèi)罐，洗滌液合并于容量瓶中并定容至刻度，混勻備用；同時(shí)做空白試驗(yàn)。

表1 糧食、蔬菜、魚肉類試樣微波消解參考條件

步驟	1	2	3
功率（1600W）變化／(％)	50	80	100
溫度／ ℃	80	120	160
升溫時(shí)間／min	30	30	30
保溫時(shí)間／min	5	7	5

表2 油脂、糖類試樣微波消解參考條件

步驟	1	2	3	4	5
功率（1600W）變化／(％)	50	70	80	100	100
溫度/℃	50	75	100	140	180
升溫時(shí)間／min	30	30	30	30	30
保溫時(shí)間／min	5	5	5	7	5

5.2.3 回流消解法

5.2.3.1 糧食

稱取1.0g~4.0g（到0.001g）試樣，置于消化裝置錐形瓶中，加玻璃珠數(shù)粒，加45 mL硝酸、10mL硫酸，轉(zhuǎn)動(dòng)錐形瓶防止局部炭化，裝上冷凝管后，小火加熱，待開始發(fā)泡即停止加熱，發(fā)泡停止后，加熱回流2h．如加熱過程中溶液變棕色，再加5mL硝酸，繼續(xù)回流2h，消解到樣品*溶解，一般放淡黃色或無色，放冷后從冷凝管上端小心加20mL水，繼續(xù)加熱回流10min，放冷，用適量水沖洗冷凝管，沖洗液并入消化液中，將消化液經(jīng)玻璃棉過濾于100mL容量瓶?jī)?nèi)，用少量水洗錐形瓶、濾器，洗液并入容量瓶?jī)?nèi)，加水至刻度，混勻。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

5.2.3.2 植物油及動(dòng)物油脂

稱取1.0g~3.0g（到0.001g）試樣，置于消化裝置錐形瓶中，加玻璃珠數(shù)粒，加入7mL硫酸，小心混勻至溶液顏色變?yōu)樽厣缓蠹?0 mL硝酸，以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后，小火加熱……同時(shí)做空白試驗(yàn)”步驟操作。

5.2.3.3 薯類、豆制品

稱取1.0g~4.0g（到0.001g）搗碎混勻的試樣(薯類須預(yù)先洗凈晾干)，置于消化裝置錐形瓶中，加玻璃珠數(shù)粒及30 mL硝酸、5 mL硫酸，轉(zhuǎn)動(dòng)錐形瓶防止局部炭化。以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后，小火加熱……同時(shí)做空白試驗(yàn)”步驟操作。

5.2.3.4 肉、蛋類

稱取0.5g~2.0g（到0.001g）搗碎混勻的試樣，置于消化裝置錐形瓶中，加玻璃珠數(shù)粒及30mL硝酸、5mL硫酸，轉(zhuǎn)動(dòng)錐形瓶防止局部炭化。以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后，小火加熱……同時(shí)做空白試驗(yàn)”步驟操作。

5.2.3.5 乳及乳制品

稱取1.0g~4.0g（到0.001g）乳或乳制品，置于消化裝置錐形瓶中，加玻璃珠數(shù)粒及30 mL硝酸，乳加 10mL硫酸，乳制品加5 mL硫酸，轉(zhuǎn)動(dòng)錐形瓶防止局部炭化。以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后，小火加熱……同時(shí)做空白試驗(yàn)”步驟操作。

5.3 測(cè)定

5.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

分別吸取50 ng／mL汞標(biāo)準(zhǔn)使用液0.00mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50 mL于 50 mL容量瓶中，用硝酸溶液(1+9)稀釋至刻度，混勻．各自相當(dāng)于汞濃度為0.00ng／mL、0.20ng／mL、0.50ng／mL、1.00ng／mL、1.50ng／mL、2.00ng／mL、 2.50 ng／mL。

5.3.2 試樣溶液的測(cè)定

設(shè)定好儀器條件，連續(xù)用硝酸溶液(1+9)進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定之后，轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)系列測(cè)量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線．轉(zhuǎn)入試樣測(cè)量，先用硝酸溶液(1+9)進(jìn)樣，使讀數(shù)基本回零，再分別測(cè)定試樣空白和試樣消化液，每測(cè)不同的試樣前都應(yīng)清洗進(jìn)樣器。試樣測(cè)定結(jié)果按公式(1)計(jì)算。

5.4 儀器參考條件

光電倍增管負(fù)高壓：240V；汞空心陰極燈電流，30mA；原子化器溫度：300℃；載氣流速：500mL／min；屏蔽氣流速：1 000mL／min。

6 分析結(jié)果的表述

試樣中汞的含量按式(1)進(jìn)行計(jì)算。

式中：

X——試樣中汞的含量，單位為毫克每千克或毫克每升(mg／kg或mg／L)：

c——試樣消化液中汞的含量，單位為納克每毫升(ng／mL)，

c0——試劑空白液中汞的含量，單位為納克每毫升(ng／mL)，

V——試樣消化液定容總體積，單位為毫升(mL)；

1000——換算系數(shù)；

m——試樣質(zhì)量，單位為克或毫升(g或mL)．

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

7 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的20％。

8 其他

當(dāng)樣品稱樣量為0.5g，定容體積為25mL時(shí)，方法檢出限0.003mg/kg，方法定量限0.010mg/kg。

第二法冷原子吸收光譜法

9 原理

汞蒸氣對(duì)波長(zhǎng)253．7nm的共振線具有強(qiáng)烈的吸收作用。試樣經(jīng)過酸消解或催化酸消解使汞轉(zhuǎn)為離子狀態(tài)，在強(qiáng)酸性介質(zhì)中以氯化亞錫還原成元素汞，載體將元素汞吹入汞測(cè)定儀，進(jìn)行冷原子吸收測(cè)定，在一定濃度范圍其吸收值與汞含量成正比，外標(biāo)法定量．

10 試劑和材料

注：除非另有說明，所用試劑均為優(yōu)級(jí)純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。

10.1 試劑

10.1.1 硝酸(HNO3)。

10.1.2 鹽酸（HCl）。

10.1.3 過氧化氫(H2O2)(30％)。

10.1.4 無水氯化鈣（CaCl2）：分析純。

10.1.5 高錳酸鉀（KMnO4）：分析純。
10.1.6 重鉻酸鉀（K2Cr2O7）：分析純。

10.2 試劑配置

10.2.1 高錳酸鉀溶液(50g／L)：稱取5．0g高錳酸鉀置于100mL棕色瓶中，以水溶解稀釋至100mL。

10.2.2 硝酸溶液(5+95)：量取5mL硝酸，緩緩倒入95 mL水中，混勻。

10.2.3 重鉻酸鉀的硝酸溶液（0.5g/L）：稱取0．05g重鉻酸鉀溶于100mL硝酸溶液（5+95）中。

10.2.4 氯化亞錫溶液(100 g/L)；稱取10 g氯化亞錫溶于20mL鹽酸中，90 ℃水浴中加熱，輕微振蕩，待氯化亞錫溶解成透明狀后，冷卻，純水稀釋定容至100mL，加入幾粒金屬錫，置陰涼、避光處保存。一經(jīng)發(fā)現(xiàn)渾濁應(yīng)重新配制。

10.2.5 硝酸溶液（1+9）：量取50mL硝酸，緩緩加入450mL水中。

10.3 標(biāo)準(zhǔn)品

（HgCl2）：純度 ≥99 ％。

10.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

10.4.1 汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00mg/mL）：準(zhǔn)確稱取0．135 4g干燥過的HgO，用重鉻酸鉀的硝酸溶液（0.5g/L）溶解并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容。此溶液濃度為1.00mg/mL。于4 ℃冰箱中避光保存，可保存兩年。或購買經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)。

10.4.2 汞標(biāo)準(zhǔn)中間液（10μg／mL）：吸取1.00mL汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00 mg/mL）于100mL容量瓶中，用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g／L)稀釋和定容。此溶液濃度為10μg／mL。于4 ℃冰箱中避光保存，可保存兩年。

10.4.3 汞標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（50ng／mL）：吸取0.50mL的汞標(biāo)準(zhǔn)中間液（10μg／mL）于100mL容量瓶中，用0.5g/L重鉻酸鉀的硝酸溶液稀釋和定容，此溶液濃度為50ng／mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

11 儀器和設(shè)備

注：玻璃器皿及聚四氟乙烯消解內(nèi)罐均需以硝酸溶液（1+4）浸泡24h，用水反復(fù)沖洗，后用去離子水沖冼干凈。

11.1 測(cè)汞儀(附氣體循環(huán)泵、氣體干燥裝置、汞蒸氣發(fā)生裝置及汞蒸氣吸收瓶)，或全自動(dòng)測(cè)汞儀。

11.2 天平：感量為0.1mg和1mg。

11.3 微波消解系統(tǒng)。

11. 4 壓力消解器。

11.5 恒溫干燥箱（200 ℃~300 ℃）。

11.6 控溫電熱板（50 ℃~200 ℃）。

11.7 超聲水浴箱。

12 分析步驟

12.1 試樣預(yù)處理

見 5.1。

12. 2 試樣消解(可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件選用以下任何一種方法消解)

12.2.1 壓力罐消解法

見 5.2.1 。

12.2.2 微波消解法。

見 5.2.2 。

12.2.3 回流消解法。

見 5.2.3 。

12.3 儀器參考條件。

打開測(cè)汞儀，預(yù)熱1h，并將儀器性能調(diào)至狀態(tài)。

12.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

分別吸取汞標(biāo)準(zhǔn)使用液（50 ng／mL）0.00mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50 mL于 50 mL容量瓶中，用硝酸溶液(1+9)稀釋至刻度，混勻．各自相當(dāng)于汞濃度為0.00ng／mL、0.20ng／mL、0.50ng／mL、1.00ng／mL、1.50ng／mL、2.00ng／mL、 2.50 ng／mL。將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別置于測(cè)汞儀的汞蒸汽發(fā)生器中，連接抽氣裝置，沿壁迅速加入3.0mL還原劑氯化亞錫(100 g/L)，迅速蓋緊瓶塞，隨后有氣泡產(chǎn)生，立即通入流速為1.0L/min 的氮?dú)饣蚪?jīng)活性炭處理的空氣，使汞蒸汽經(jīng)過氯化鈣干燥管進(jìn)入測(cè)汞儀中，從儀器讀數(shù)顯示的高點(diǎn)測(cè)得其吸收值。然后，打開吸收瓶上的三通閥將產(chǎn)生的剩余汞蒸汽吸收于高錳酸鉀溶液（50g/L）中，待測(cè)汞儀上的讀數(shù)達(dá)到零點(diǎn)時(shí)進(jìn)行下一次的測(cè)定。同時(shí)做空白試驗(yàn)。求得吸光度值與汞質(zhì)量關(guān)系的一元線性回歸方程。

12.5 試樣溶液的測(cè)定

分別稱取樣液和試劑空白液各5.0mL置于測(cè)汞儀的汞蒸汽發(fā)生器的還原瓶中，以下按照12.4 “連接抽氣裝置......同時(shí)做空白試驗(yàn)”進(jìn)行操作。將所測(cè)得的吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的一元線性回歸方程中求得試樣溶液中汞含量。

13 分析結(jié)果的表述

試樣中汞含量按式(2)進(jìn)行計(jì)算：

式中：

X——試樣中汞含量，單位為毫克每千克或毫克每升（mg／kg或mg／L);

m1——測(cè)定樣液中汞質(zhì)量，單位納克(ng)；

m2——空白液中汞質(zhì)量，單位納克(ng)；

V1——試樣消化液定容總體積，單位為毫升(mL)；

1000——換算系數(shù)；

V2——測(cè)定用樣液體積，單位為亳升(mL)；

m——試樣質(zhì)量，單位為克或毫升(g或mL)。

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

14 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的20％。

15 其他

當(dāng)樣品稱樣量為0.5g，定容體積為25mL時(shí)，方法檢出限0.002mg/kg，方法定量限0.007mg/kg。

食品中甲基汞的測(cè)定

液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用方法

16 原理

食品中的甲基汞經(jīng)超聲波輔助5 mol/L鹽酸溶液提取后，選用C18反向色譜柱分離，色譜流入液進(jìn)入在線紫外消解系統(tǒng)，在紫外光照射下與強(qiáng)氧化劑過硫酸鉀反應(yīng)，甲基汞轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)汞。酸性環(huán)境下，無機(jī)汞與硼氫化鉀在線反應(yīng)生成汞蒸汽，由原子熒光光譜儀測(cè)定。由保留時(shí)間定性，外標(biāo)法峰面積定量。

17 試劑和材料

17.1 試劑

17.1.1 甲醇（CH3OH）：色譜純。

17.1.2 氫氧化鈉（NaOH）。

17.1.3 氫氧化鉀（KOH）。

17.1.4 硼氫化鉀（KBH4）：分析純。

17.1.5 過硫酸鉀（K2S2O8）：分析純。

17.1.6 乙酸銨（CH3COONH4）：分析純。

17.1.7 鹽酸（HCl）。

17.1.8 氨水（NH3.H2O）。

17.1.9 L-半胱氨酸（L—HSCH2CH(NH2)COOH）：分析純。

17.2 試劑配置

17.2.1 流動(dòng)相（5％的甲醇+0.06mol/L乙酸銨+0.1％ L-半胱氨酸）：稱取0.5g L-半胱氨酸，2.2g乙酸銨，置于500mL容量瓶中，用水溶解，再加入25mL甲醇，后用水定容至500mL。經(jīng)0.45μm有機(jī)系濾膜過濾后，于超聲水浴中超聲脫氣30min。現(xiàn)用現(xiàn)配。

17.2.2 鹽酸溶液（5mol/L）：量取208mL鹽酸，溶于水并稀釋至500mL。

17.2.3 鹽酸溶液10％（體積比）：量取100mL鹽酸，溶于水并稀釋至1000mL。

17.2.4 氫氧化鉀溶液（5 g/L）：稱取5.0g氫氧化鉀，溶于水并稀釋至1000mL。

17.2.5 氫氧化鈉溶液（6 mol/L）：稱取24 g氫氧化鈉，溶于水并稀釋至100mL。

17.2.6 硼氫化鉀溶液( 2 g/L）：稱取2.0 g硼氫化鉀，用氫氧化鉀溶液（5 g/L）溶解配稀釋至1000mL。現(xiàn)用現(xiàn)配。

17.2.7 過硫酸鉀溶液（2 g/L）：稱取1.0 g過硫酸鉀，用氫氧化鉀溶液（5 g/L）溶解配稀釋至500mL。現(xiàn)用現(xiàn)配。

17.2.8 L-半胱氨酸溶液（10g/L）：稱取0.1g L-半胱氨酸，溶于10mL水中。現(xiàn)用現(xiàn)配。

17.2.9 甲醇溶液（1+1）：量取甲醇100mL，加入100mL水中，混勻。

17.3 標(biāo)準(zhǔn)品

17.3.1 （HgCl2）：純度≥99％。

17.3.2 氯化甲基汞（HgCH3Cl）：純度≥99％。

17.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置：

17.4.1 HgCl2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（200μg／mL，以汞計(jì)）：準(zhǔn)確稱取0.0270gHgO，用重鉻酸鉀的硝酸溶液（0.5g/L）溶解，并稀釋、定容至100mL。于4 ℃冰箱中避光保存，可保存兩年。或購買經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)。

17.4.2 甲基汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（200μg／mL，以汞計(jì)）：準(zhǔn)確稱取0.0250g氧化甲基汞，加少量甲醇溶解，用甲醇溶液（1+1）稀釋和定容至100mL。于4 ℃冰箱中避光保存，可保存兩年。或購買經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)。

17.4.3 混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.00μg／mL，以汞計(jì)）：準(zhǔn)確移取0.50mL甲基汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和0.5mL HgCl2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于100mL容量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。此混合標(biāo)準(zhǔn)使用液中，兩種汞化合物的濃度均為1.00μg／mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

18 儀器和設(shè)備

注：玻璃器皿均需以硝酸溶液（1+4）浸泡24h，用水反復(fù)沖洗，后用去離子水沖冼干凈。

18.1 液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用儀（LC-AFS）：由液相色譜儀（包括液相色譜泵和手動(dòng)進(jìn)樣閥）、在線紫外消解系統(tǒng)及原子熒光光譜儀組成。

18.2 天平：感量為0.1mg和1.0mg。

18.3 組織勻漿器。

18.4 高速粉碎機(jī)。

18.5 冷凍干燥機(jī)。

18.6 離心機(jī)：大轉(zhuǎn)速10000r/min。

18.7 超聲清洗器。

19 分析步驟

19.1 試樣預(yù)處理

見 5.1 。

19.2 試樣提取

稱取樣品0.50 g~2.0g（至0.001g），置于15mL塑料離心管中，加入10mL的鹽酸溶液（5mol/L），放置過夜。室溫下超聲水浴提取60 min，期間振搖數(shù)次。4 ℃下以8000r/min轉(zhuǎn)速離心 15min。準(zhǔn)確吸取2.0mL上清液至5mL容量瓶或刻度試管中，逐滴加入氫氧化鈉溶液（6 mol/L），使樣液pH為2~7。加入0.1mL的 L-半胱氨酸溶液（10g/L），后用水定容至刻度。0.45μm有機(jī)系濾膜過濾，待測(cè)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

注：滴加氫氧化鈉溶液（6 mol/L）時(shí)應(yīng)緩慢逐滴加入，避免酸堿中和產(chǎn)生的熱量來不及擴(kuò)散，使溫度很快升高，導(dǎo)致汞化合物揮發(fā)，造成測(cè)定值偏低。

19.3 儀器參考條件

19.3.1 液相色譜參考條件

液相色譜參考條件如下：

——色譜柱：C18分析柱（柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5 μm），C18預(yù)柱（柱長(zhǎng)10mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5 μm）。

——流速：1.0mL/min。

——進(jìn)樣體積：100μL。

19.3.2 原子熒光檢測(cè)參考條件

原子熒光檢測(cè)參考條件

原子熒光檢測(cè)參考條件如下：

——負(fù)高壓：300V；

——汞燈電流：30mA；

——原子化方式：冷原子；

——載液：10％鹽酸溶液；

——載液流速：4.0mL/min；

——還原劑：2 g/L硼氫化鉀溶液；

——還原劑流速：4.0mL/min。

——氧化劑：2 g/L過硫酸鉀溶液，氧化劑流速1.6 mL/min。

——載氣流速：500mL/min。

——輔助氣流速：600mL/min。

19.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

取5支10 mL容量瓶，分別準(zhǔn)確加入混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.00μg／mL）0.00mL、0.010mL、0.020mL、0.040mL、0.060mL和0.10mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度。此標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度分別為0.0ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、6.0ng/mL和10.0ng/mL。吸取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液100μL 進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

試樣溶液的測(cè)定：將試樣溶液100μL注入液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用儀中，得到色譜圖，以保留時(shí)間定性。以外表法峰面積定量。平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液的色譜圖參考如下：

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖